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      技術服務
      引物增值服務
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      基本概念:
      引物是一小段單鏈核酸,作為DNA復制的起始點,在PCR反應時,與模板鏈通過堿基互補結合,在taq酶,dNTP等參與下,完成DNA鏈的復制。引物的長度,GC含量,TM值等對PCR成功與否起到至關重要的作用。

      引物類型:
      1 定量PCR引物,染料法引物和探針法引物
      2 普通PCR引物
      3 兼并引物,可以擴增不同的模板
      4 多重PCR引物
      5 基因全長引物
      6 miRNA莖環、引物和探針
      7 巢式PCR引物,較難擴增的片段推薦使用
      8 lncRNA引物
      9 環狀RNA引物

      服務優勢:
      1 周期短,對于不同基因設計2-3對引物,同時進行實驗,可以有效縮短實驗周期
      2 重復性好,使用客戶提供的cDNA或者DNA進行實驗,確?蛻粼谑盏揭锖,可以順利完成實驗


      可以用于正式實驗的引物必須滿足以下條件:
      1 溶解曲線單峰,窄而尖,否則可能有非特異性擴增;峰的位置橫坐標一般在80度以上,這個溫度為PCR產物的解鏈溫度,如果在75度附近,可能是引物二聚體,miRNA染料法檢測時,溶解曲線的峰的位置可能在75度附近




      2 瓊脂糖電泳為明亮的一條帶,條帶一般在100bp以上,如果設計引物時PCR產物在100bp以下,需要仔細辨認是否為引物二聚體;引物二聚體的條帶一般在50bp左右,條帶彌散,暗。


       
      3 擴增曲線呈“S”形,一般情況下,S形越陡,擴增效率越高,S形越平,擴增效率低。有時會出現擴增曲線只有線性期,沒有指數期的情況,這時一般擴增效率較低,建議檢測一下擴增效率,用標準曲線法計算相對表達量。


       
      4 樣品Ct值小于30,對于Ct大于30的情況,建議重新設計一對引物,重新調試。如果幾對引物的Ct值都較大,可以適當放寬Ct至35。但是Ct值肯定不能大于35。
       

      服務流程:
      1 訂單洽談,確定需要設計引物的序列或者基因名。
      如對引物的長度,TM值,產物長度等有特殊要求,需提前說明。
      2 引物設計,合成,驗證。
      3 寄送1對經過驗證的可以用于正式實驗的引物,上下游各1 OD。
      4 驗證,客戶收到引物后,進行qPCR驗證,滿足實驗要求,訂單結束。

      表單下載:

      引物增值服務訂單表.xls 

       

       

       

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